基本信息

cas：540737-29-9

中文名稱：枸櫞酸托法替尼

中文別名：托法替尼;檸檬酸托法替尼;

英文名稱：tofacitinib citrate

英文別名：Tofacitinib citrate;CP-690,550-10;Xeljanz;Tasocitinib citrate;3-((3R,4R)-4-methyl-3-(methyl(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)amino)piperidin-1-yl)-3-oxopropanenitrile 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate;Tofacitinibcitrate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid,3-[(3R,4R)-4-methyl-3-[methyl(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)amino]piperidin-1-yl]-3-oxopropanenitrile;citro;

分子式：C22H28N6O8

分子量：504.49300

精確質(zhì)量：504.19700

PSA：221.04000

LOGP：0.23418

枸櫞酸托法替尼生物活性

描述 Tofacitinib citrate是 JAK1/2/3 抑制劑，IC50 分別為1，20 和 112 nM。

相關(guān)類別

信號(hào)通路 >> 表觀遺傳學(xué) >> JAK

信號(hào)通路 >> JAK/STAT信號(hào)通路 >> JAK

信號(hào)通路 >> 干細(xì)胞及 Wnt 通路 >> JAK

研究領(lǐng)域 >> 炎癥/免疫

靶點(diǎn)

JAK3:1 nM (IC50)

JAK2:20 nM (IC50)

JAK1:112 nM (IC50)

Rock-II:3400 nM (IC50)

Lck:3870 nM (IC50)

體外研究 Tofacitinib（CP-690550）檸檬酸鹽可能在JAK3和JAK2處結(jié)合為2.2nM和5nM（Kd）。該報(bào)告包括在Camk1（Kd為5,000 nM），DCamkL3（Kd為4.5 nM），Mst2（Kd為4,300 nM），Pkn1（Kd為200 nM），Rps6ka2（Kin.Dom.2-C-）的Tofacitinib的額外結(jié)合。末端）（Kd為1,400 nM），Rps6ka6（Kin.Dom.2-C-末端）（Kd為1,200 nM），Snark（Kd為420 nM），Tnk1（Kd為640 nM）和Tyk2（Kd為620 nM） ）[1]。將K562，KCL22和THP-1細(xì)胞暴露于不同劑量的伊馬替尼（IMA）或JAK抑制劑72小時(shí)以量化酪氨酸激酶抑制劑（TKI）活性的作用。然后使用MTT測(cè)定評(píng)估細(xì)胞生長(zhǎng)抑制。 IMA以濃度依賴性方式抑制K562和KCL22細(xì)胞而非THP-1細(xì)胞的增殖。 K562的IMA的IC50值為0.28μM，KCL22的IC50值為0.17μM。盡管單獨(dú)用托法替尼（TOF）或Ruxolitinib（RUX）治療不能抑制細(xì)胞增殖，但Tofacitinib和Ruxolitinib均使K562和KCL22對(duì)IMA更敏感[4]。

體內(nèi)研究 與PEG處理的對(duì)照小鼠相比，用Tofacitinib處理的動(dòng)物顯示出顯著更低的抗藥物抗體（ADA）產(chǎn)生（初次免疫后5周，p <0.01，n = 8）。此外，ADA在第28天最早可檢測(cè)到。與第21天至第35天相比，SS1P的滴度相差1000至200倍。與SS1P相比，注射了匙孔血藍(lán)蛋白（KLH）的小鼠產(chǎn)生更快的抗體反應(yīng)。然而，與對(duì)照相比，Tofacitinib的施用降低了抗KLH滴度（第21天p <0.05，第28天p <0.01，n = 5）。從第21天到第28天，滴度的降低分別為5000到250倍[2]。基于之前的劑量反應(yīng)研究，選擇每日劑量為6.2 mg / kg的托法替尼，以提供80％的后爪體積抑制和能夠抑制JAK1和JAK3信號(hào)通路> 4小時(shí)的血漿暴露[3]。

溶解度

體外：

DMSO：≥122.5mg / mL（242.82 mM）

H 2 O：5 mg / mL（9.91 mM;需要超聲波和加溫）

* “≥”表示可溶，但飽和度未知。

儲(chǔ)備液

1 mM 1.9822 mL 9.9110 mL 19.8220 mL

5 mM 0.3964 mL 1.9822 mL 3.9644 mL

10 mM 0.1982 mL 0.9911 mL 1.9822 mL

激酶實(shí)驗(yàn) 通過與專有標(biāo)簽融合的所選激酶的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合測(cè)定記錄激酶活性。在存在和不存在測(cè)試化合物（例如，托法替尼）的情況下，激酶量與固定的活性位點(diǎn)定向配體結(jié)合的測(cè)量提供了對(duì)配體結(jié)合的DMSO對(duì)照的％。選擇0到10之間的活動(dòng)用于Kd測(cè)定。樹形圖表示由名為PhyloChem [1]的內(nèi)部可視化工具生成。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn) 使用MTT進(jìn)行細(xì)胞存活測(cè)定。簡(jiǎn)而言之，將K562，KCL22和THP-1細(xì)胞（1×10 5個(gè)細(xì)胞/孔）接種到96孔微孔板上，并用或不用IMA（0.06-1.0μM）和/或托法替尼（10-1,000nM）或RUX處理。 （10-1,000nM）在37℃，濕潤(rùn)的5％（v / v）CO 2氣氛中72小時(shí)。然后將培養(yǎng)基（200μL）與10μL的5mg / ml MTT溶液在37℃下孵育4小時(shí)。在352g離心5分鐘后，除去培養(yǎng)基，向各孔中加入100μLDMSO以溶解甲..使用酶標(biāo)儀在570nm處測(cè)量吸光度。結(jié)果表示為百分比[4]。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 小鼠[2]使用雌性BALB / c小鼠（6-8周齡）。小鼠通過滲透泵輸注（0.25μL/小時(shí)，28天）接受PEG300（100mg / mL）或單獨(dú)載體（PEG300）中的Tofacitinib。免疫前4天，將小鼠麻醉并將其背部表面剃毛。在背部做一厘米的切口以形成皮下袋并插入泵。切口部位用傷口夾閉合。從第0天開始每周（ip）注射小鼠SS1P重組免疫毒素（RIT;5μg/小鼠）;對(duì)照小鼠僅接受鹽水注射。在SS1P或載體免疫前每周，抽取50μL血液以獲得血清樣品。將血清儲(chǔ)存在-80℃直至分析。大鼠[3]在雌性Lewis大鼠中誘導(dǎo)佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎（AIA）。根據(jù)后爪體積隨機(jī)分配大鼠并將其分配給Tofacitinib或載體治療方案。每個(gè)治療組7-8只大鼠組和正常幼稚大鼠（每組n = 4）在開始治療后4小時(shí)，4天或7天安樂死（分別在免疫后第16,20和23天） 。每天一次口服給予載體或托法替尼（6.2mg / kg），在免疫后第16天開始并持續(xù)至第23天。在治療開始后第4天和第7天（分別在免疫后第20天和第23天）重新評(píng)估爪體積。 ）。對(duì)于微型計(jì)算機(jī)斷層掃描（微CT）成像，以及爪組織中的抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色，在單獨(dú)的Lewis大鼠隊(duì)列中誘導(dǎo)AIA。

存儲(chǔ)

粉末 -20°C 3年

  4°C       2年

在溶劑中 -80°C 6月

         -20°C         1月

運(yùn)輸 室溫;可能會(huì)有所不同

SMILES O=C(CC#N)N1C[C@H](N(C2=C3C(NC=C3)=NC=N2)C)[C@H](C)CC1.O=C(CC(C(O)=O)(O)CC(O)=O)O

參考文獻(xiàn)

[1]. Jiang JK, et al. Examining the chirality, conformation and selective kinase inhibition of 3-((3R,4R)-4-methyl-3-(methyl(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)amino)piperidin-1-yl)-3-oxopropanenitrile (CP-690,550). J Med Chem. 2008 Dec 25;51(24):8012-8.

[2]. Onda M, et al. Tofacitinib suppresses antibody responses to protein therapeutics in murine hosts. J Immunol. 2014 Jul 1;193(1):48-55.

[3]. LaBranche TP, et al. JAK inhibition with tofacitinib suppresses arthritic joint structural damage through decreased RANKL production. Arthritis Rheum. 2012 Nov;64(11):3531-42.

[4]. Yagi K, et al. Pharmacological inhibition of JAK3 enhances the antitumor activity of imatinib in human chronic myeloid leukemia. Eur J Pharmacol. 2018 Apr 15;825:28-33.

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